卵子凍結タイミングと融解後生存率の相関

こんにちは。北里コーポレーションの内山です。

北里コーポレーションの「北里」という社名の由来は、私たちの本社のある静岡県富士市の北側に富士山がそびえ立っており、大自然への敬意を表しながら、スタート地点を表す言葉として用いています。今回、北里コーポレーションのブログ「KITAZATO BLOG」初投稿となりますので、この新たなる出発にちなんで富士山の写真を掲載しました。

富士山

このブログでは生殖医療の治療現場での情報や知識を中心に、培養士の方々にお役に立てるコンテンツをご紹介していきたいと考えています。

さて、先日私たちは、ガラス化液の凍結融解の新製品の特長や、ラボスタッフの教育に関する内容で、加藤レディスクリニック　研究開発部江副賢二先生、培養部伊藤基樹先生に登壇いただき、ライブウェビナーを配信しました。オンデマンド配信を含めると、予想を遥かに上回る視聴や反響を頂き、大変感謝申し上げます。

ウェビナーの中でご紹介できなかった受講者の方々からの質問に対して、講師の先生より回答をいただきましたので、私の経験なども交えながらご紹介します。

卵子凍結の最適なタイミングとは？

卵子を凍結するタイミングによって、融解後の生存率が影響をうけると考えているのですが、ベストな凍結のタイミングはいつだとお考えですか？

加藤レディスクリニック研究開発部主任江副賢二先生

凍結するタイミングは融解後生存率にも関わっていますが、その後の発生能に大きく影響を及ぼすと報告されています。

当院では基本的にトリガーから34～36時間後に採卵を行い、卵子の成熟を確認次第すぐに凍結しています。採卵からの時間が経ちすぎてしまうとin vitro agingが起こってしまうためです。

また融解後の媒精のタイミングも発生成績に大きく関与します。融解後に細胞質ならびに紡錘体の回復をしっかりと確認してから顕微授精を行うことが望ましいです。

当院では融解後に3時間回復培養を行っています。

融解後の卵子の生存率を向上させる3つのポイント

融解後の卵子の生存率を向上させる3つのポイントは下記と考えています。

①ガラス化液に平衡・置換する際の物理的ダメージを軽減する

②ガラス化液への置換が十分であるか確認する

③融解の際の復水が緩慢になるようにする

①に関しては、卵子を胚と同様に平衡させると浸透圧による影響で細胞骨格が大きく変形してしまいますので、卵子用のプロトコールでゆっくりと平衡することが重要になります。

②に関しては、卵子は細胞質が大きい為VSでしっかりと置換する必要があります。浸漬時間が計90秒未満にならないようにしてください。またVS終了時に卵子をWellの底に置き、浮いてこないことを確認する必要があります。

③に関しては、プロトコール通りにTS（Thawing Solution）からDS（Diluent Solution）、DSからWS（Washing Solution）に卵子を移動させる際に前液を持ち込むことを意識する必要があります。
卵子は細胞質が大きく膜にかかるテンションが強い為、ゆっくりと回復させることが重要です。

以上、卵子凍結の技術的なポイントをかなり詳細にお示し頂きました。

北里コーポレーションのガラス化凍結融解キットをプロトコール通りに実施して頂けると、江副先生のポイントは全てカバーできると思います。